ABCA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418931

概要

Abca2は、マウス細胞において主にエンドリソソーム膜に局在するATP結合カセット（ABC）トランスポーターであるABCA2をコードしており、細胞内の脂質取扱いおよび小胞輸送に寄与します。ABCA2はコレステロールおよびスフィンゴ脂質の恒常性調節に関与するとされ、膜組成や、エンドサイトーシス、リソソーム機能、髄鞘関連の脂質生物学といった過程に影響を及ぼします。ABCA2活性の変化は、実験系において神経細胞およびグリア細胞の生物学、神経変性に関連する経路、ならびに多剤耐性様の表現型との関連が報告されています。そのためAbca2は、脂質輸送をストレス応答、プロテオスタシス、そして神経系における細胞種特異的な脆弱性と結び付けて考える文脈で、しばしば研究対象となっています。

ABCA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAbca2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Abca2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Abca2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ABCA2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ABCA2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Abca2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ABCA2の機能に不可欠なAbca2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Abca2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ABCA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびABCA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Abca2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ABCA2 HDRプラスミド（m）および ABCA2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAbca2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAbca2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。