AATC Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405477-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- AATCO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase AATC (h) e o Plasmídeo Double Nickase AATC (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para GOT1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:AATC Anticorpo (H-8): sc-515641
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
AATC Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-405477-NIC | 20 µg | $410.00 |
O GOT1 humano codifica a aspartato aminotransferase citosólica (AATC), uma enzima dependente de fosfato de piridoxal que catalisa a transaminação reversível entre aspartato e α-cetoglutarato para gerar oxaloacetato e glutamato. Essa atividade conecta o metabolismo de aminoácidos ao shuttle malato–aspartato, sustentando o equilíbrio redox de NADH, a anaplerose e o fluxo de carbono para o ciclo do TCA. A função de GOT1 se integra ao manejo de nitrogênio e aos pools de glutamato/aspartato, que influenciam programas biossintéticos e respostas celulares ao estresse. A desregulação do roteamento metabólico associado ao GOT1 tem sido estudada em contextos de bioenergética e homeostase redox alteradas, relevantes para mecanismos de doenças proliferativas e degenerativas.
AATC O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GOT1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GOT1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GOT1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GOT1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.