5-LO CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401239

概要

ALOX5は5-リポキシゲナーゼ（5-LO）をコードしており、これは非ヘム鉄型のジオキシゲナーゼで、アラキドン酸代謝においてロイコトリエンA4（LTA4）へ至る最初の不可逆的段階を触媒します。LTA4はその後、生理活性をもつロイコトリエンへと変換されます。5-LO活性は、細胞内カルシウム動態、FLAP（ALOX5AP）との膜結合、リン酸化依存性のシグナル伝達、そして細胞の酸化還元状態によって制御されており、自然免疫の活性化や炎症性脂質メディエーターネットワークと結び付いています。CysLT受容体およびBLT受容体を介するロイコトリエンシグナルは、白血球の走化性、血管透過性、サイトカイン放出を調節し、ALOX5を喘息・アレルギー性炎症、動脈硬化、腫瘍関連炎症に関わる経路の中に位置付けます。さらに、ALOX5の発現異常や経路フラックスの乱れは、酸化ストレス、マクロファージ分極、ならびにシクロオキシゲナーゼ（COX）由来プロスタノイドとのエイコサノイド間クロストークを扱う研究において、機序解析の指標（リードアウト）としても用いられます。

5-LO CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるALOX5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ALOX5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ALOX5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、5-LOタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、5-LOシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ALOX5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• 5-LOの機能に不可欠なALOX5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ALOX5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• 5-LO CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）および5-LO CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ALOX5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  5-LO HDRプラスミド（h）および 5-LO HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはALOX5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のALOX5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。