2B28 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432576

概要

Ubxn1（2B28とも呼ばれる）は、UBXドメインを含むアダプタータンパク質をコードしており、ユビキチン依存的なプロセスをAAA+ ATPaseであるp97/VCPに結び付け、基質の引き抜きと分解（ターンオーバー）を協調的に制御します。この連関を通じて、UBXN1は小胞体関連分解（ERAD）を含むプロテオスタシスの制御、タンパク質品質管理の調節、ならびにストレス応答性シグナル伝達の調整に寄与します。UBXN1は、細胞周期の進行や、ミスフォールドしたタンパク質／凝集しやすいタンパク質の処理に影響する経路にも関与するとされ、神経変性やがん生物学に関連する機構とのつながりが示唆されています。マウス系では、Ubxn1を撹乱することにより、p97/VCPを中心としたネットワークや、ユビキチン介在性のタンパク質複合体リモデリングを解析するための扱いやすいアプローチとなります。

2B28 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUbxn1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ubxn1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ubxn1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、2B28タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、2B28シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ubxn1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• 2B28の機能に不可欠なUbxn1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ubxn1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• 2B28 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）および2B28 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ubxn1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  2B28 HDRプラスミド（m）および 2B28 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUbxn1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUbxn1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。