20S Proteasome α2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401450-ACT

PSMA2 codifica la subunità α2 del proteasoma 20S umano, un componente centrale del proteasoma 26S che si assembla nell’anello α del barile catalitico 20S e contribuisce a regolare l’ingresso dei substrati e la stabilità del complesso. Attraverso il sistema ubiquitina–proteasoma, PSMA2 contribuisce al turnover ATP-dipendente di proteine mal ripiegate o a breve emivita, modulando la proteostasi, la progressione del ciclo cellulare, le risposte allo stress e l’elaborazione degli antigeni. L’attività del proteasoma interseca la segnalazione di NF-κB, le risposte al danno del DNA e la degradazione regolata di importanti fattori trascrizionali e regolatori del ciclo cellulare. Un’alterata funzione del proteasoma è implicata in stati di stress proteotossico ed è stata associata a segnali oncogenici e a vie correlate alla neurodegenerazione, a supporto del suo impiego come nodo per studi meccanicistici dell’omeostasi proteica.

20S Proteasome α2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PSMA2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

20S Proteasome α2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PSMA2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PSMA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di 20S Proteasome α2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PSMA2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da 20S Proteasome α2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via 20S Proteasome α2 nelle cellule tumorali con espressione di PSMA2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.