20S Proteasome α2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401450-ACT

PSMA2 codifica a subunidade α2 do proteassoma 20S humano, um componente central do proteassoma 26S que se monta no anel α do cilindro catalítico 20S e ajuda a regular a entrada de substratos e a estabilidade do complexo. Por meio do sistema ubiquitina–proteassoma, PSMA2 contribui para a degradação dependente de ATP de proteínas mal dobradas ou de curta meia-vida, moldando a proteostase, a progressão do ciclo celular, as respostas ao estresse e o processamento de antígenos. A atividade do proteassoma se cruza com a sinalização de NF-κB, as respostas a danos no DNA e a degradação regulada de importantes reguladores transcricionais e do ciclo celular. A desregulação da função do proteassoma está implicada em estados de estresse proteotóxico e tem sido associada à sinalização oncogênica e a vias relacionadas à neurodegeneração, sustentando seu uso como um ponto-chave para estudos mecanísticos da homeostase proteica.

20S Proteasome α2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PSMA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

20S Proteasome α2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PSMA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PSMA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de 20S Proteasome α2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PSMA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de 20S Proteasome α2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via 20S Proteasome α2 em células tumorais com expressão de PSMA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.