Particules Lentivirales d'Activation (m) γ-GCSc: sc-420573-LAC

Gclc code la sous-unité catalytique de la glutamate–cystéine ligase (γ-GCSc), enzyme limitante de la biosynthèse de novo du glutathion, qui couple le glutamate et la cystéine pour former la γ-glutamylcystéine. En contrôlant la disponibilité intracellulaire du glutathion, la γ-GCSc est un régulateur central de l’homéostasie rédox, de la détoxification des espèces réactives de l’oxygène et des réponses cellulaires aux xénobiotiques ainsi qu’au stress électrophile, avec des liens étroits aux programmes antioxydants pilotés par NRF2 et à la sensibilité à la ferroptose. Dans les systèmes murins, l’altération de l’activité de Gclc est fréquemment utilisée pour modéliser la biologie du stress oxydant dans le foie, le poumon, le cerveau et les cellules immunitaires, où le pouvoir tampon dépendant du glutathion influence la fonction mitochondriale, la signalisation inflammatoire et l’adaptation métabolique. Une synthèse du glutathion dérégulée et une expression anormale de Gclc ont été associées à une susceptibilité aux lésions induites par des toxiques ainsi qu’à des déséquilibres rédox observés dans divers modèles de maladies neurodégénératives, métaboliques et inflammatoires.

Les particules d'activation lentivirales γ-GCSc (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Gclc dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales γ-GCSc (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Gclc, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de γ-GCSc. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Gclc ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.