βB3-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419827

概要

Crybb3はβB3-クリスタリンをコードしており、β/γ-クリスタリンファミリーに属する構造タンパク質として、水晶体線維細胞の構築、長距離秩序（long-range order）、および透明性の維持に寄与する。βB3-クリスタリンはクリスタリン複合体の形成に関与し、水晶体の発生・成熟過程においてタンパク質の安定性と屈折特性を支える。クリスタリンの恒常性が破綻すると、タンパク質凝集、酸化還元バランスの変化、水晶体の光散乱が促進され得ることから、Crybb3は水晶体におけるプロテオスタシスや細胞ストレス応答を制御する経路と関連づけられる。マウスモデルでは、クリスタリン組成の変化はしばしば水晶体変性や白内障様表現型の文脈で研究されている。

βB3-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCrybb3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Crybb3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Crybb3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、βB3-crystallinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、βB3-crystallinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Crybb3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• βB3-crystallinの機能に不可欠なCrybb3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Crybb3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• βB3-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびβB3-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Crybb3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  βB3-crystallin HDRプラスミド（m）および βB3-crystallin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCrybb3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCrybb3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。