βA4-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419824

概要

Cryba4はβA4-クリスタリンをコードしており、βA4-クリスタリンはマウス水晶体における主要な構造タンパク質（クリスタリン）の一つとして、屈折特性と長期的な水晶体透明性の維持に寄与します。β/γ-クリスタリンスーパーファミリーの一員として、βA4-クリスタリンは水晶体線維細胞の分化に関与し、光学的均一性を保つための、密に詰まった高度に秩序化されたタンパク質集合体の形成に寄与します。さらに、クリスタリンネットワーク内での安定性や相互作用は、シャペロン介在性のフォールディングや、酸化ストレスおよび加齢関連ストレス下での凝集からの保護といった、タンパク質恒常性（プロテオスタシス）過程にも影響します。クリスタリン組成の破綻または調節異常は水晶体の混濁表現型と関連しており、Cryba4が白内障関連機序や眼の発生研究における重要な遺伝子座であることを示唆しています。

βA4-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCryba4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cryba4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cryba4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、βA4-crystallinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、βA4-crystallinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cryba4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• βA4-crystallinの機能に不可欠なCryba4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cryba4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• βA4-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびβA4-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cryba4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  βA4-crystallin HDRプラスミド（m）および βA4-crystallin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCryba4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCryba4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。