β2B Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400059

概要

TUBB2Bはβ2Bチューブリンをコードしており、これはニューロンで高発現するβチューブリンのアイソタイプで、αチューブリンとヘテロ二量体を形成して微小管を組み立て、細胞骨格の完全性を支えます。チューブリン重合体によって駆動される微小管の動態は、有糸分裂紡錘体の構築、細胞内輸送、神経突起の伸長、神経細胞の移動を制御し、TUBB2Bを細胞分裂や神経発生といった基本的プロセスに結び付けています。微小管細胞骨格の構成要素として、β2Bチューブリンは微小管結合タンパク質やモーター複合体との相互作用を介して、軸索輸送や大脳皮質の層構造形成を制御する経路と関わります。TUBB2Bの病的変異はチューブリノパチーや皮質形成異常と関連することが報告されており、神経発達表現型の背景にある細胞骨格機構を研究するための遺伝学的な手掛かりを提供します。

β2B Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTUBB2B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TUBB2B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TUBB2Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、β2B Tubulinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、β2B Tubulinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TUBB2B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• β2B Tubulinの機能に不可欠なTUBB2Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TUBB2Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• β2B Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびβ2B Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TUBB2B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  β2B Tubulin HDRプラスミド（h）および β2B Tubulin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTUBB2Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTUBB2B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。