Plasmide Double Nickase (h) β-1,4-Gal-T4: sc-407251-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) β-1,4-Gal-T4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide β-1,4-Gal-T4 Double Nickase (h) et le plasmide β-1,4-Gal-T4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant B4GALT4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) β-1,4-Gal-T4 | sc-407251-NIC | 20 µg | $410.00 |
B4GALT4 code la β-1,4-galactosyltransférase 4 humaine (β-1,4-Gal-T4), une glycosyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui transfère un galactose sur la N-acétylglucosamine afin de générer des glycannes galactosylés liés en β1,4 sur les glycoprotéines et les glycolipides. Par sa contribution au traitement des N-glycannes et à l’extension des lactosamines, la β-1,4-Gal-T4 influence le trafic des protéines dépendant des glycannes, l’organisation des récepteurs à la surface cellulaire et les interactions cellule–cellule médiées par les lectines. Une galactosylation β1,4 altérée est fréquemment étudiée dans le contexte de programmes de glycosylation dérégulés qui modèlent la signalisation, l’adhésion et la reconnaissance immunitaire dans des états cellulaires associés aux maladies. B4GALT4 est donc pertinent pour des investigations mécanistiques des voies de glycosylation du Golgi et de la manière dont le remodelage des glycannes affecte le phénotype cellulaire.
β-1,4-Gal-T4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus B4GALT4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de B4GALT4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de B4GALT4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de B4GALT4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.