β-1,4-Gal-T4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407251

概要

B4GALT4は、ゴルジ体に局在するβ-1,4-ガラクトシルトランスフェラーゼであるβ-1,4-Gal-T4をコードしており、N-アセチルグルコサミンにガラクトースを転移して、N結合型およびO結合型糖鎖、ならびに糖脂質上にタイプIIラクトサミン単位を構築します。糖鎖修飾への寄与を通じて、β-1,4-Gal-T4はタンパク質のフォールディング、輸送、受容体の細胞内滞在時間、そして糖鎖結合タンパク質によって媒介される細胞—細胞／細胞—細胞外基質相互作用に影響を与えます。ガラクトシル化やラクトサミン伸長の変化はシグナル伝達ネットワークや免疫認識を再構築し得るため、B4GALT4依存的な糖鎖リモデリングは、炎症や腫瘍細胞の挙動といった疾患関連プロセスと結び付けられます。より広範な糖転移酵素ネットワークの一部として、B4GALT4は細胞表面グライコームの組成を規定し、接着、遊走、分化プログラムに影響を及ぼします。

β-1,4-Gal-T4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるB4GALT4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、B4GALT4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、B4GALT4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、β-1,4-Gal-T4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、β-1,4-Gal-T4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、B4GALT4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• β-1,4-Gal-T4の機能に不可欠なB4GALT4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、B4GALT4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• β-1,4-Gal-T4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびβ-1,4-Gal-T4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、B4GALT4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  β-1,4-Gal-T4 HDRプラスミド（h）および β-1,4-Gal-T4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはB4GALT4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のB4GALT4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。