β-1,3-Gal-T4 Double Nickaseプラスミド (m): sc-424825-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- β-1,3-Gal-T4 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- β-1,3-Gal-T4ダブルニカースプラスミド（m）およびβ-1,3-Gal-T4ダブルニカースプラスミド（m2）は、B3galt4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
β-1,3-Gal-T4 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-424825-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスB3galt4は、ゴルジ体に局在する糖転移酵素β-1,3-Gal-T4をコードしており、糖脂質および糖タンパク質の生合成に重要なβ1,3-ガラクトシル化反応を触媒する。複雑なグリカンの組み立てに関与することで、B3galt4は膜マイクロドメインの組織化、受容体輸送、細胞間コミュニケーションといった過程に寄与し、これらは糖スフィンゴ脂質代謝やより広範な糖鎖修飾経路とも交差している。糖鎖修飾パターンの変化は、神経機能、免疫シグナル、腫瘍細胞の表現型の変化としばしば関連するため、B3galt4はグライコーム依存的な制御を研究するうえで重要なノードとなる。したがってB3galt4の撹乱は、発生や疾患に関連する細胞文脈において、特定の糖鎖構造がシグナル伝達や接着をどのように調節するかを検証するために有用である。
β-1,3-Gal-T4 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における B3galt4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、B3galt4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、B3galt4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、B3galt4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。