Plasmide Double Nickase (m) β-1,3-Gal-T4: sc-424825-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) β-1,3-Gal-T4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide β-1,3-Gal-T4 Double Nickase (m) et le plasmide β-1,3-Gal-T4 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant B3galt4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) β-1,3-Gal-T4 | sc-424825-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin B3galt4 code la β-1,3-Gal-T4, une glycosyltransférase localisée dans l’appareil de Golgi qui catalyse des étapes de β1,3-galactosylation importantes pour la biosynthèse des glycolipides et des glycoprotéines. Par son rôle dans l’assemblage de glycannes complexes, B3galt4 contribue à l’organisation des microdomaines membranaires, au trafic des récepteurs et aux processus de communication cellule–cellule, en lien avec le métabolisme des glycosphingolipides et, plus largement, avec les voies de glycosylation. Des profils de glycosylation altérés sont fréquemment associés à des modifications de la fonction neuronale, de la signalisation immunitaire et des phénotypes des cellules tumorales, ce qui fait de B3galt4 un nœud pertinent pour l’étude de la régulation dépendante du glycome. La perturbation de B3galt4 est donc utile pour explorer comment des structures glycaniques spécifiques modulent la signalisation et l’adhérence dans des contextes cellulaires liés au développement et aux maladies.
β-1,3-Gal-T4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus B3galt4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de B3galt4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de B3galt4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de B3galt4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.