α1b Tubulin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400021-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- α1b Tubulin Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- α1b Tubulinダブルニカースプラスミド（h）およびα1b Tubulinダブルニカースプラスミド（h2）は、TUBA1Bを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: α1b Tubulin 抗体 (1H10): sc-134238
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
α1b Tubulin Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400021-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α1b Tubulin Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400021-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBA1Bは、微小管の中核的な構造要素であるα1bチューブリンをコードしており、細胞骨格の構築、細胞内輸送、有糸分裂紡錘体の動態を担います。α/βチューブリンヘテロ二量体は重合して、染色体分配、細胞極性、小胞輸送などの過程を制御し、細胞周期の進行や微小管依存的シグナル伝達を司る経路の中心的存在です。チューブリン発現や微小管動態の変化は、染色体不安定性や異常増殖としばしば関連するため、TUBA1Bは腫瘍生物学の基盤機構や、細胞骨格攪乱に対するストレス応答を研究する上で有用な結節点となります。広く発現する細胞骨格遺伝子としてのTUBA1Bは、微小管の完全性が不可欠な神経分化や軸索輸送の研究にも貢献します。
α1b Tubulin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TUBA1B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TUBA1B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TUBA1Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TUBA1Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。