CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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α1a Tubulin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400022-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- α1a Tubulin Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- α1a Tubulinダブルニカースプラスミド（h）およびα1a Tubulinダブルニカースプラスミド（h2）は、TUBA1Aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: α1a Tubulin 抗体 (7-RY28): sc-134237
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
α1a Tubulin Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400022-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α1a Tubulin Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400022-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBA1A は α1a チューブリンをコードしており、α1a チューブリンは微小管の中核構成要素です。微小管は重合して動的なフィラメントを形成し、有糸分裂紡錘体の形成、細胞内輸送、細胞極性の維持に必須です。α1a チューブリンは細胞周期を通じて細胞骨格の再編成および微小管依存的プロセスを支え、適切な染色体分配と神経細胞の形態形成を可能にします。TUBA1A 機能の変化は微小管ダイナミクスの破綻や大脳皮質発生の異常と関連しており、神経発達障害や細胞骨格制御異常の研究において重要です。ヒトにおける主要な α-チューブリンアイソフォームとして、微小管の組み立て、安定性、ならびに微小管結合タンパク質やモーター複合体との相互作用を解析する目的で、しばしば用いられます。
α1a Tubulin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TUBA1A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TUBA1A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TUBA1Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TUBA1Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。