ZSWIM7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407996-ACT

ZSWIM7 (proteína contendo dedo de zinco do tipo SWIM 7) é uma proteína associada ao reparo de DNA, implicada na recombinação homóloga e na manutenção da estabilidade genômica. Ela tem sido relacionada à resolução de intermediários de recombinação e dá suporte ao reparo preciso de quebras de dupla fita do DNA, contribuindo para a segregação fiel dos cromossomos durante a divisão celular. Por meio dessas funções, a ZSWIM7 se conecta a vias centrais da resposta a danos no DNA e à biologia mais ampla do estresse replicativo. A perturbação genética de ZSWIM7 tem sido associada à capacidade reduzida de reparo do DNA e ao aumento da instabilidade genômica, tornando-a relevante para estudos mecanísticos em genética do câncer e em doenças hereditárias de manutenção do genoma.

ZSWIM7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZSWIM7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZSWIM7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZSWIM7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZSWIM7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZSWIM7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZSWIM7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZSWIM7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZSWIM7 em células tumorais com expressão de ZSWIM7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.