ZNF462 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412915-ACT

ZNF462は、発生過程および細胞運命の決定におけるクロマチン依存的な遺伝子発現制御に関与するとされる亜鉛フィンガー型転写因子をコードします。配列特異的なDNA結合と、系譜コミットメント、増殖、分化に影響するエピジェネティック制御機構とを協調させることで、転写プログラムを調節していると考えられています。ZNF462の機能喪失や発現量（遺伝子量）の変化は、神経発達の表現型や頭蓋顔面の異常と関連づけられており、発生に関わる遺伝子制御ネットワークにおける役割を裏付けています。実験系では、ZNF462が転写制御、クロマチン構造、ならびに神経系および間葉系の分化を司る下流経路に与える影響が研究されています。

ZNF462 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ZNF462の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ZNF462 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ZNF462 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZNF462転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ZNF462の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZNF462遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZNF462依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZNF462発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZNF462経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。