Plásmido CRISPR de Activación (h) ZNF395: sc-403829-ACT

ZNF395 codifica un factor de transcripción con dedos de zinc implicado en la regulación de programas de expresión génica vinculados a la adaptación al estrés celular, incluidas redes transcripcionales sensibles a la hipoxia. Se ha descrito que interactúa con salidas de señalización inflamatoria y de la inmunidad innata, influyendo en vías asociadas a citocinas y en una reprogramación transcripcional más amplia. La actividad desregulada de ZNF395 se ha asociado con alteraciones en el control del estado celular y se ha estudiado en el contexto de la biología tumoral y otras afecciones en las que la hipoxia y la inflamación moldean fenotipos relevantes para la enfermedad. Como proteína nuclear de unión al ADN, ZNF395 es un nodo útil para desentrañar los circuitos transcripcionales que gobiernan la proliferación, la supervivencia y las respuestas al microambiente.

ZNF395 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZNF395 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZNF395 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZNF395 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZNF395, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZNF395. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZNF395 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZNF395 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZNF395 en células tumorales con expresión de ZNF395 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.