ZNF143 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423169-ACT

O gene murino Zfp143 codifica o fator de transcrição ZNF143, uma proteína de ligação ao DNA específica de sequência que sustenta a arquitetura de promotores e programas transcricionais amplos. O ZNF143 participa da transcrição dependente da RNA polimerase II, da organização da cromatina e da regulação de redes gênicas associadas ao ciclo celular e à replicação, incluindo genes ligados ao início da replicação do DNA e à estabilidade do genoma. Por meio dessas atividades, alterações na expressão de ZNF143 são frequentemente estudadas em contextos de controle da proliferação, desregulação transcricional e remodelamento da expressão gênica responsivo ao estresse. Em sistemas murinos, o Zfp143 serve como um nó útil para dissecar circuitos regulatórios que influenciam programas de desenvolvimento e estados transcricionais relevantes para doenças.

ZNF143 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Zfp143 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZNF143 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Zfp143 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Zfp143, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZNF143. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Zfp143 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZNF143 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZNF143 em células tumorais com expressão de Zfp143 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.