ZIP10 Double Nickaseプラスミド (m): sc-432673-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ZIP10 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ZIP10ダブルニカースプラスミド（m）およびZIP10ダブルニカースプラスミド（m2）は、Slc39a10を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ZIP10 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-432673-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZIP10 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-432673-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Slc39a10 は、細胞質内の Zn²⁺ 利用可能量およびそれに下流する亜鉛依存的な酵素反応・転写プログラムを制御する、マウスの ZIP10（SLC39 ファミリー）亜鉛流入トランスポーターをコードする。ZIP10 は細胞膜での亜鉛取り込みを調節することで、亜鉛がセカンドメッセンジャーや補因子として働くシグナル伝達、酸化ストレス応答、免疫細胞機能などの過程に影響を与える。亜鉛輸送の恒常性破綻は炎症の調節異常や代謝ストレスと関連づけられており、ZIP10 依存的な亜鉛制御は造血系および上皮の生物学の文脈でしばしば研究されている。そのため Slc39a10 は、サイトカインシグナル、レドックス制御、細胞分化プログラムなど、亜鉛により制御される経路の機構解明に重要である。
ZIP10 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Slc39a10 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Slc39a10内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Slc39a10の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Slc39a10が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。