Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ZIP-kinase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409173
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ZIP-kinase El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ZIP-kinase, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ZIP-kinase Anticuerpo (C-3): sc-514223
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ZIP-kinase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-409173 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
DAPK3 (ZIP-quinasa) es una quinasa de serina/treonina regulada por Ca2+/calmodulina que coordina la dinámica actomiosínica y la señalización contráctil mediante la fosforilación de la cadena ligera reguladora de la miosina y otros sustratos citoesqueléticos relacionados. Participa en vías que controlan la formación de fibras de estrés, el “blebbing” (ampollamiento) de membrana, la citocinesis y la muerte celular programada, vinculando la remodelación del citoesqueleto con las respuestas celulares al estrés. La actividad de la ZIP-quinasa se intersecta con la contractilidad regulada por ROCK/MLCK y puede influir en las salidas transcripcionales a través de nodos de señalización dependientes de la fosforilación. La desregulación de la señalización de DAPK3 se ha asociado con fenotipos alterados de proliferación, motilidad y apoptosis relevantes para la biología del cáncer, así como con mecanismos de enfermedad vascular e inflamatoria en los que el tono del músculo liso y la organización del citoesqueleto se ven alterados.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ZIP-kinase (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DAPK3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DAPK3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DAPK3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ZIP-kinase.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DAPK3 para la investigación de la señalización de ZIP-kinase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de DAPK3 críticos para la función de ZIP-kinase
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DAPK3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ZIP-kinase CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ZIP-kinase CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DAPK3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ZIP-kinase (h) y el plásmido HDR ZIP-kinase (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DAPK3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DAPK3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.