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ZHX1CRISPR激活质粒(h) | sc-407666-ACT | 20 µg | $397.00 |
锌指与同源盒蛋白1(ZHX1)是一种核内转录因子,含有多个 C2H2 锌指基序和同源盒结构域,使其能够进行序列特异性的 DNA 结合,并调控与细胞命运决定和分化相关的基因表达程序。ZHX1 可通过与其他核内因子协同作用,参与转录抑制/激活网络,调节与染色质相关的过程及谱系特异性转录。已有研究报道 ZHX1 的表达在多种疾病背景中发生改变,包括癌症及免疫相关失调,这与其在控制增殖、凋亡以及分化相关通路中的作用相一致。这些特征使 ZHX1 成为在人体细胞模型中研究转录调控回路、表观遗传调控以及应激响应型基因表达的一个重要节点。
ZHX1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ZHX1的表达。
ZHX1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的ZHX1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于ZHX1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ZHX1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的ZHX1位点,并能够研究内源性位点上依赖于ZHX1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ZHX1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ZHX1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。