ZDHHC5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411833-ACT

ZDHHC5 codifica uma palmitoiltransferase da família DHHC que catalisa a S-palmitoilação de proteínas associadas à membrana, regulando o seu tráfego, estabilidade e compartimentalização na membrana plasmática e nos sistemas endossomais. Ao controlar ciclos dinâmicos de lipidação, ZDHHC5 influencia a transdução de sinais, a organização de receptores sinápticos e imunológicos e a remodelação do citoesqueleto, com efeitos a jusante na adesão e migração celular. Redes de palmitoilação desreguladas envolvendo ZDHHC5 têm sido associadas a alterações na sinalização neuronal e à modulação de vias oncogênicas, tornando-o relevante para estudos de neurobiologia e do comportamento de células cancerígenas. Como enzima localizada em membrana, ZDHHC5 é frequentemente investigada no contexto de localização proteica, transporte vesicular e sinalização dependente de modificações pós-traducionais.

ZDHHC5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZDHHC5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZDHHC5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZDHHC5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZDHHC5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZDHHC5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZDHHC5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZDHHC5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZDHHC5 em células tumorais com expressão de ZDHHC5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.