ZC3H13 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-426493-ACT

Zc3h13 codifica a ZC3H13, uma proteína de ligação a RNA do tipo dedo de zinco CCCH que atua como componente central da maquinaria associada ao complexo escritor de N6‑metiladenosina (m6A) em mRNA. Em células de camundongo, a ZC3H13 favorece a localização nuclear e atua como estrutura de suporte (scaffold) para complexos reguladores de m6A, influenciando o processamento co‑transcricional de RNA, o splicing alternativo, a estabilidade do mRNA e programas de expressão gênica ligados a decisões de destino celular. Por meio dessas funções, a ZC3H13 se conecta a vias que governam a regulação transcricional e o controle pós‑transcricional que moldam o desenvolvimento e a homeostase tecidual. A desregulação de componentes da via de m6A, incluindo redes associadas à ZC3H13, tem sido implicada em estados de diferenciação alterados e assinaturas transcricionais relevantes para doenças, tornando Zc3h13 um alvo útil para estudos mecanísticos.

ZC3H13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Zc3h13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZC3H13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Zc3h13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Zc3h13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZC3H13. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Zc3h13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZC3H13 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZC3H13 em células tumorais com expressão de Zc3h13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.