YME1L1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424248

Visão geral

Yme1l1 codifica a YME1L1, uma metaloprotease i-AAA dependente de ATP inserida na membrana interna mitocondrial, que realiza controle de qualidade ao degradar proteínas mal dobradas ou danificadas e ao processar reguladores-chave da dinâmica mitocondrial. Ao controlar a renovação de substratos envolvidos na fusão da membrana interna dependente de OPA1, na integridade da cadeia respiratória e na proteostase, a YME1L1 ajuda a manter a arquitetura das cristas e a função bioenergética mitocondrial. A perda ou desregulação de YME1L1 perturba a mitofagia, aumenta a sinalização de estresse mitocondrial e pode promover fragmentação, alterações na fosforilação oxidativa e maior suscetibilidade à apoptose. Esses processos são amplamente relevantes para modelos de neurodegeneração, disfunção cardiometabólica e outros distúrbios ligados ao comprometimento da homeostase mitocondrial.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO YME1L1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Yme1l1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Yme1l1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Yme1l1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína YME1L1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Yme1l1 para a investigação da sinalização de YME1L1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Yme1l1 críticos para a função YME1L1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Yme1l1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo YME1L1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo YME1L1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Yme1l1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo YME1L1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR YME1L1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Yme1l1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Yme1l1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.