XRCC2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403531-ACT

XRCC2 codifica um parálogo de RAD51 que atua na via de recombinação homóloga (HR) para reparar quebras de dupla fita no DNA e estabilizar forquilhas de replicação estagnadas. O XRCC2 participa da formação do filamento de RAD51 e coopera com outros parólogos de RAD51 para promover a invasão de fita precisa e a resolução de danos no DNA. A desregulação do XRCC2 compromete a estabilidade do genoma, eleva as aberrações cromossômicas e aumenta a sensibilidade ao estresse de replicação, ligando sua atividade a vias que governam os checkpoints do ciclo celular e a sinalização da resposta a danos no DNA. Variantes ou função reduzida de XRCC2 têm sido associadas a fenótipos hereditários de instabilidade genômica e à suscetibilidade ao câncer, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de defeitos no reparo do DNA.

XRCC2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de XRCC2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

XRCC2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus XRCC2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição XRCC2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de XRCC2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus XRCC2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de XRCC2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via XRCC2 em células tumorais com expressão de XRCC2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.