XBP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400131-ACT

XBP1 (proteína 1 de ligação ao X-box) é um fator de transcrição bZIP que atua como um efetor central da resposta a proteínas mal dobradas (UPR) a jusante da sinalização de estresse do RE. Após o splicing mediado por IRE1, o XBP1 ativo programa redes transcricionais que ampliam a capacidade de dobramento do RE, aumentam a degradação associada ao RE e promovem a biossíntese de lipídios e a homeostase da via secretora. A atividade de XBP1 influencia a diferenciação e a função de tipos celulares secretórios e molda programas de células imunes, incluindo o desenvolvimento de plasmócitos e os desfechos de sinalização inflamatória. A desregulação da sinalização XBP1/UPR tem sido implicada na adaptação de células cancerosas ao estresse proteotóxico, em doenças metabólicas e em neurodegeneração, tornando-a um nó amplamente utilizado em estudos mecanísticos de resiliência ao estresse e proteostase.

XBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de XBP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

XBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus XBP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição XBP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de XBP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus XBP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de XBP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via XBP1 em células tumorais com expressão de XBP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.