Wnt-7a Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401188-ACT

WNT7A codifica a glicoproteína secretada Wnt-7a, um ligante-chave na sinalização Wnt que regula a especificação do destino celular, a proliferação, a polaridade e a migração durante o desenvolvimento e a homeostase de tecidos adultos. A Wnt-7a pode interagir com receptores Frizzled/LRP para ativar a transcrição dependente de β-catenina, bem como vias não canônicas que influenciam a organização do citoesqueleto e a polaridade planar celular. Na biologia humana, o WNT7A é particularmente relevante para o padrão de desenvolvimento dos membros, as interações epitélio–mesênquima e a regulação da arquitetura tecidual, sendo que a desregulação da sinalização Wnt está amplamente implicada em malformações congênitas e processos oncogênicos. Modificar a expressão de WNT7A é, portanto, útil para dissecar o crosstalk entre vias e programas transcricionais dependentes do contexto controlados por ligantes Wnt.

Wnt-7a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WNT7A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Wnt-7a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WNT7A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WNT7A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Wnt-7a. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WNT7A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Wnt-7a no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Wnt-7a em células tumorais com expressão de WNT7A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.