Plásmido CRISPR de Activación (h) Wnt-7a: sc-401188-ACT

WNT7A codifica la glucoproteína secretada Wnt-7a, un ligando clave de la señalización Wnt que regula la especificación del destino celular, la proliferación, la polaridad y la migración durante el desarrollo y la homeostasis de los tejidos adultos. Wnt-7a puede interactuar con los receptores Frizzled/LRP para activar la transcripción dependiente de β-catenina, así como vías no canónicas que influyen en la organización del citoesqueleto y la polaridad planar celular. En la biología humana, WNT7A es particularmente relevante para el patrón de las extremidades, las interacciones epitelio-mesénquima y la regulación de la arquitectura tisular; la desregulación de la señalización Wnt se ha implicado ampliamente en malformaciones congénitas y procesos oncogénicos. Por ello, modular la expresión de WNT7A resulta útil para analizar la comunicación cruzada entre vías y los programas transcripcionales dependientes del contexto controlados por ligandos Wnt.

Wnt-7a El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de WNT7A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Wnt-7a El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus WNT7A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional WNT7A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Wnt-7a. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo WNT7A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Wnt-7a en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Wnt-7a en células tumorales con expresión de WNT7A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.