Wnt-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400982

概要

WNT1は、分泌型糖タンパク質であるWnt-1をコードしており、モルフォゲンとして、またFrizzled/LRP受容体のリガンドとして機能して、正 canonical なWnt/β-カテニンシグナル伝達を活性化します。β-カテニンの安定化とTCF/LEF依存性転写の制御を介して、Wnt-1は発生および組織恒常性の維持における細胞運命の決定、増殖、分化に影響を与えます。WNT1の活性は上皮の組織化や前駆細胞プログラムを制御する経路とも連関しており、Wntシグナルの破綻は腫瘍性形質転換や異常な増殖制御に広く関与するとされています。さらに、WNT1のバリアントは骨格生物学や骨形成に関わる表現型との関連も報告されており、発生研究および再生研究における重要性が示されています。

Wnt-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるWNT1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、WNT1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、WNT1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Wnt-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Wnt-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、WNT1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Wnt-1の機能に不可欠なWNT1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、WNT1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Wnt-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびWnt-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、WNT1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Wnt-1 HDRプラスミド（h）および Wnt-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWNT1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWNT1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。