WNK2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407834-ACT

WNK2（with-no-lysine［K］ kinase 2）は、イオン輸送および細胞シグナル伝達の上流制御因子として機能するセリン／スレオニンキナーゼをコードしており、膜トランスポーターや細胞骨格ダイナミクスを調節するリン酸化カスケードに影響を与えます。ヒト細胞では、WNK2は浸透圧バランスやMAPK関連のシグナル出力に影響する各種の入力シグナルを統合し、増殖、遊走、ストレス応答などの過程を形作ります。WNK2の発現変化や制御の破綻は、がん生物学をはじめ、キナーゼ駆動性の経路バランスが乱れる他の状況においても、シグナル伝達ネットワークの異常と関連づけられており、経路間クロストークの機構研究に有用な結節点となります。経路レベルの影響を持つキナーゼとして、WNK2は疾患関連の細胞モデルにおける下流トランスポーター制御やシグナルの再配線に与える影響の観点から、しばしば研究されています。

WNK2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性WNK2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

WNK2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における WNK2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はWNK2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性WNK2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のWNK2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるWNK2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびWNK2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるWNK2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。