WIBG CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409500

概要

PYM1はヒトタンパク質WIBGをコードしており、WIBGはメッセンジャーリボヌクレオタンパク質（mRNP）生物学の構成要素として、転写後の遺伝子発現制御の協調に関与するとされています。WIBGは、転写産物の安定性や翻訳に影響を及ぼすRNA代謝過程との関連が示されており、増殖・分化する細胞におけるタンパク質産生量の動的な制御を支えます。これらの役割を通じて、WIBGはプロテオーム恒常性や細胞ストレス応答を司る経路とも交差し、疾患に関連する状況でしばしば撹乱されるプロセスに関わります。mRNAのプロセシングや翻訳の破綻は多様な病態と関連するため、WIBGは遺伝子発現制御の機構研究における有用な標的となります。

WIBG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPYM1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PYM1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PYM1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、WIBGタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、WIBGシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PYM1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• WIBGの機能に不可欠なPYM1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PYM1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• WIBG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびWIBG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PYM1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  WIBG HDRプラスミド（h）および WIBG HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPYM1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPYM1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。