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Wee 1慢病毒激活颗粒(h) | sc-400701-LAC | 200 µl | $455.00 |
WEE1 编码 Wee1 激酶,是 G2/M 检查点的核心调控因子。它通过抑制性磷酸化来抑制 CDK1–Cyclin B 的活性,在 DNA 复制与修复完成之前延缓细胞进入有丝分裂。Wee1 整合来自 ATR/CHK1 介导的复制压力应答信号,使细胞周期进程与基因组完整性维持相协调,并影响 S 期动态、检查点信号传导以及有丝分裂灾难。WEE1 活性失调与增殖调控改变以及在基因组不稳定状态下对检查点通路依赖性增强有关。因此,WEE1 在 DNA 损伤应答网络、染色体不稳定性以及复制压力下决定细胞命运的机制研究中被广泛关注。
Wee 1 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 WEE1 表达。
Wee 1 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在WEE1转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性Wee 1表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 WEE1 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。