WDR73 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405788-ACT

WDR73 codifica uma proteína contendo repetições WD, implicada em processos citoplasmáticos e nucleares que sustentam a homeostase de tecidos proliferativos, com funções relatadas na progressão do ciclo celular, na organização do citoesqueleto e na manutenção da morfologia celular. As estruturas de repetição WD com função de plataforma geralmente coordenam complexos multiproteicos, sugerindo que a WDR73 contribui para redes reguladas de sinalização e tráfego intracelular que moldam o desenvolvimento de células neuronais e renais. A disrupção genética de WDR73 tem sido associada a anomalias do neurodesenvolvimento e a fenótipos de nefropatia, em consonância com funções na maturação do cérebro e dos rins. Assim, WDR73 é de interesse para o estudo de relações genótipo–fenótipo em modelos de doenças do neurodesenvolvimento e renais, bem como de vias que governam a diferenciação e as respostas ao estresse celular.

WDR73 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WDR73 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WDR73 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WDR73 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WDR73, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WDR73. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WDR73 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WDR73 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WDR73 em células tumorais com expressão de WDR73 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.