WASP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400712-ACT

ヒトのWAS遺伝子はWiskott–Aldrich症候群タンパク質（WASP）をコードしており、造血系細胞に特異的に発現するアクチン細胞骨格リモデリングの制御因子である。WASPは、受容体近傍のシグナル伝達をArp2/3依存的なアクチン核形成へと結び付ける。Cdc42、ホスホイノシチド、SH3ドメインをもつアダプターとの相互作用を通じて、WASPは免疫シナプス形成、走化性、貪食、ならびに小胞輸送を統合的に制御し、T細胞およびB細胞の活性化に加えて自然免疫のエフェクター機能にも影響を与える。WASPの活性は免疫受容体とインテグリンからのシグナルを統合し、免疫応答時の細胞骨格ダイナミクスと転写出力を制御する。WAS機能の破綻は免疫不全や炎症の制御異常と関連するため、WAS/WASPはヒト免疫細胞における細胞骨格駆動型シグナル伝達の機構解明における重要な研究標的である。

WASP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性WASの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

WASP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における WAS 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はWAS転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性WASPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のWAS遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるWASP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびWAS発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるWASP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。