VpreB3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423685

概要

Vpreb3は、B細胞の発生過程における免疫グロブリンの組み立てと品質管理に関与する、代理軽鎖関連タンパク質VpreB3をコードします。発生途上のB系統細胞では、VpreB3は小胞体におけるプロテオスタシスや免疫グロブリン軽鎖成分の取り扱いと関連し、pre-B細胞受容体の成熟およびその後のシグナル伝達能に影響を与えます。この経路の制御が変化すると、B細胞の分化状態、抗体レパートリー形成、ならびに小胞体関連の処理に結び付いた細胞ストレス応答に影響し得ます。これらの特性により、Vpreb3はマウスモデルにおいてB細胞成熟機構や免疫グロブリン生合成を解析するための有用な標的となります。

VpreB3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるVpreb3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Vpreb3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Vpreb3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VpreB3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VpreB3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Vpreb3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VpreB3の機能に不可欠なVpreb3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Vpreb3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VpreB3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびVpreB3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Vpreb3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VpreB3 HDRプラスミド（m）および VpreB3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVpreb3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVpreb3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。