Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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VPRBP Double Nickase Plasmid (h): sc-403283-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das VPRBP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- VPRBP Double-Nickase-Plasmid (h) und VPRBP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DCAF1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: VPRBP: sc-376850
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
VPRBP Double Nickase Plasmid (h) | sc-403283-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
VPRBP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403283-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DCAF1 kodiert VPRBP, einen Substratrezeptor des CUL4–DDB1-E3-Ubiquitin-Ligase-Komplexes, der die Ubiquitinierung und den proteasomalen Abbau spezifischer Proteinziele mitsteuert. Durch die Regulation der Proteinstabilität trägt VPRBP zur Kontrolle der Zellzyklusprogression, von DNA-Schadensantworten und chromatinassoziierten Prozessen bei, die Transkriptionsprogramme beeinflussen. VPRBP wurde außerdem mit Signalnetzwerken in Verbindung gebracht, die die Regulation von Kinasen und die Checkpoint-Kontrolle umfassen, was es für Studien zur Genomintegrität und proliferativem Stress relevant macht. Eine Dysregulation der CUL4–DDB1–DCAF1-Aktivität wurde mit veränderter Proteostase in krebsbezogenen Kontexten und anderen Erkrankungen assoziiert, bei denen die ubiquitinvermittelte Regulation gestört ist.
VPRBP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DCAF1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DCAF1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DCAF1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DCAF1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.