Von Hippel Lindau/VHL CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400528-ACT

VHLは、ヒッペル・リンドウ病（von Hippel–Lindau）腫瘍抑制因子をコードしており、ヒドロキシ化されたHIF-1αおよびHIF-2αをプロテアソーム分解へと導くVCB-CUL2型E3ユビキチンリガーゼ複合体における基質認識サブユニットとして機能します。酸素濃度依存的にHIFの転写プログラムを制御することで、VHLは低酸素シグナル伝達、血管新生因子の発現、代謝適応、ならびに赤血球産生関連経路を調節します。さらにVHLは、細胞外マトリックスの構築、微小管の安定化、繊毛（一次繊毛）関連シグナルにも寄与し、細胞極性やストレス応答のより広範な制御とも結び付いています。VHLの欠失または機能不全は、異常な低酸素シグナルの亢進と強く関連しており、フォン・ヒッペル・リンドウ病および腎細胞がんの生物学における代表的な特徴です。

Von Hippel Lindau/VHL CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性VHLの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Von Hippel Lindau/VHL CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における VHL 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はVHL転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Von Hippel Lindau/VHLの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のVHL遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVon Hippel Lindau/VHL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびVHL発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVon Hippel Lindau/VHL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。