VEGF-D Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401669-ACT

O gene humano **VEGFD** codifica o **VEGF-D**, um fator de crescimento secretado que sinaliza principalmente por meio do **VEGFR-3** e, após processamento proteolítico, também pode interagir com o **VEGFR-2** para promover a proliferação, migração e sobrevivência de células endoteliais linfáticas e vasculares. O VEGF-D contribui para a linfangiogênese, o remodelamento vascular e a comunicação cruzada de sinalização ligada à matriz extracelular com as vias **PI3K–AKT**, **MAPK/ERK** e da **família SRC**. Sua expressão é regulada por sinais do desenvolvimento e inflamatórios e frequentemente é estudada no contexto da diferenciação endotelial, da homeostase de fluidos teciduais e do tráfego de células imunes. A atividade desregulada do VEGF-D tem sido associada a remodelamento linfático patológico e a alterações vasculares/linfáticas associadas a tumores, sustentando sua relevância em modelos mecanísticos de biologia do câncer e de doenças inflamatórias.

VEGF-D O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VEGFD sem alterar a sequência de ADN subjacente.

VEGF-D O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VEGFD em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VEGFD, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de VEGF-D. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VEGFD nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de VEGF-D no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via VEGF-D em células tumorais com expressão de VEGFD silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.