VDUP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400664-ACT

チオレドキシン結合タンパク質TXNIP（VDUP1とも呼ばれる）は、酸化還元状態に感受性をもつ制御因子であり、チオレドキシンに結合して細胞の抗酸化能や酸化ストレス応答を調節します。TXNIPは、グルコース取り込みや解糖系フラックスに影響することで、栄養・ストレスシグナルと代謝を統合し、AMPKをはじめとするエネルギー感知経路ともクロストークします。さらに、複数の細胞状況においてNLRP3インフラマソーム活性やサイトカイン産生に作用し、酸化還元バランスの破綻を炎症性シグナルへと結び付けます。TXNIP発現の破綻は、代謝機能障害、血管炎症、神経変性に伴うストレス表現型、ならびに腫瘍細胞の酸化・栄養ストレスへの適応と関連づけられており、疾患関連経路研究における機構的ハブとしての有用性が示唆されています。

VDUP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TXNIPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

VDUP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TXNIP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTXNIP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性VDUP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTXNIP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVDUP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTXNIP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVDUP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。