VCAM-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400135-ACT

O VCAM1 codifica a molécula de adesão celular vascular 1 (VCAM-1), um recetor de adesão induzível da superfamília das imunoglobulinas expresso no endotélio ativado, que medeia a adesão firme de leucócitos e a migração transendotelial através da ligação a integrinas como a VLA-4 (α4β1). A sua expressão é fortemente aumentada por citocinas inflamatórias por meio das vias de sinalização NF-κB e MAPK, ligando a ativação endotelial ao tráfego de células imunitárias, a alterações na permeabilidade vascular e à infiltração tecidular. A VCAM-1 participa em programas de inflamação vascular que se cruzam com respostas ao stress oxidativo e com redes de citocinas/quimiocinas. A expressão desregulada de VCAM1 está associada a estados inflamatórios crónicos, ao desenvolvimento de lesões ateroscleróticas e a interações imunitárias entre tumor e estroma, tornando-a uma leitura molecular útil para a ativação endotelial e para a biologia do recrutamento de leucócitos.

VCAM-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VCAM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

VCAM-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VCAM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VCAM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de VCAM-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VCAM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de VCAM-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via VCAM-1 em células tumorais com expressão de VCAM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.