VAT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405997

概要

VAT1（vesicle amine transport 1）は、神経組織および分泌組織に多く存在する保存性の高い周辺膜タンパク質をコードし、シナプス小胞や有芯（dense-core）小胞に関連します。VAT1は小胞の生合成と輸送に関与するとされ、神経伝達物質やホルモンの放出を形作る制御性エキソサイトーシスおよびエンドサイトーシス過程を支えます。これらの役割を通じて、VAT1は膜動態、酸化還元（レドックス）関連のタンパク質相互作用、ならびに高分泌性細胞における細胞ストレス応答を制御する経路と結び付きます。VAT1発現の変化は、神経変性、がん関連形質、代謝異常に関する研究で報告されており、小胞依存的シグナル伝達の機序解明における有用な解析ノードとなっています。

VAT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるVAT1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、VAT1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、VAT1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VAT1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VAT1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、VAT1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VAT1の機能に不可欠なVAT1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、VAT1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VAT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびVAT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、VAT1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VAT1 HDRプラスミド（h）および VAT1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVAT1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVAT1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。