Plásmido CRISPR de Activación (h) VAP-1: sc-401777-ACT

AOC3 codifica la proteína de adhesión vascular-1 (VAP-1), una glucoproteína de superficie en células endoteliales y de músculo liso que actúa tanto como molécula de adhesión como amina oxidasa dependiente de cobre (SSAO). Al catalizar la desaminación oxidativa de aminas primarias, VAP-1 genera aldehídos, peróxido de hidrógeno y amoníaco, vinculando el tráfico de leucocitos con la señalización redox y las respuestas inflamatorias vasculares. VAP-1 contribuye al rodamiento, la adhesión y la transmigración de leucocitos, e interactúa con vías que regulan la activación endotelial, la remodelación de la matriz extracelular y el estrés oxidativo. La actividad desregulada de AOC3/VAP-1 se ha asociado con estados inflamatorios crónicos y patología vascular, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en modelos de investigación centrados en inmunometabolismo e inflamación.

VAP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AOC3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

VAP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AOC3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AOC3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de VAP-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AOC3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de VAP-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía VAP-1 en células tumorales con expresión de AOC3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.