V-ATPase α1双切口酶质粒(h): sc-403882-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- V-ATPase α1 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- V-ATPase α1双切酶质粒（h）和V-ATPase α1双切酶质粒（h2）编码针对ATP6V1A的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：V-ATPase α1: sc-293336，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
V-ATPase α1双切口酶质粒(h) | sc-403882-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
V-ATPase α1双切口酶质粒(h2) | sc-403882-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V1A 编码液泡型 H\+-ATP 酶（V-ATPase）α1 的 V1 结构域催化性 A 亚基，是由 ATP 驱动、用于酸化内体、溶酶体和分泌囊泡的质子泵核心组成部分。V-ATPase α1 通过调控细胞器 pH，支持受体介导的内吞作用、自噬通量、溶酶体降解、囊泡运输，以及与溶酶体表面 mTORC1 营养感知的耦联。V-ATPase 的正常活性同样是高尔基体和内体对蛋白质与脂质进行加工处理所必需，从而影响抗原呈递与信号的周转。V-ATPase 依赖的酸化失衡与神经退行性变、肿瘤细胞的代谢适应与侵袭，以及蛋白质稳态和突触功能缺陷等有关，因此 ATP6V1A 是开展通路聚焦机制研究的有用靶点。
V-ATPase α1 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 ATP6V1A 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对ATP6V1A内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏ATP6V1A的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了ATP6V1A基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。