USP14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425567

概要

Usp14は、ユビキチン特異的ペプチダーゼ14（USP14）をコードしている。USP14はプロテアソームに結合する脱ユビキチン化酵素であり、ユビキチン鎖をトリミングして26Sプロテアソームにおける基質処理を調節する。ユビキチンのリサイクルやタンパク質代謝回転を制御することで、USP14はプロテオスタシス、ストレス応答、ならびにユビキチン依存的分解に結び付いたシグナル出力に影響を及ぼす。マウス細胞では、USP14活性の変化が神経細胞の維持やシナプス機能の破綻と関連付けられており、神経生物学においてプロテアソーム動態のバランスが重要であることと整合する。さらにUSP14は、タンパク質品質管理や細胞恒常性を司る経路とも交差しており、ユビキチン–プロテアソーム系の機能不全の機構解明研究において重要な対象となる。

USP14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUsp14遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Usp14内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Usp14のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、USP14タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、USP14シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Usp14欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• USP14の機能に不可欠なUsp14エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Usp14ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• USP14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUSP14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Usp14遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  USP14 HDRプラスミド（m）および USP14 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUsp14ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUsp14標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。