uPA/urokinase/PLAU Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400694-ACT

PLAU codifica o ativador do plasminogénio do tipo uroquinase (uPA), uma serino-protease secretada que converte o plasminogénio em plasmina, promovendo a proteólise pericelular e a remodelação da matriz extracelular. Por meio de interações com o recetor de uPA (PLAUR/uPAR), o uPA concentra a atividade proteolítica na superfície celular e ativa redes de sinalização que influenciam a adesão e a migração, incluindo vias associadas a integrinas e a fatores de crescimento. A atividade de PLAU molda a fibrinólise, a reparação de feridas e a remodelação tecidular, e a sua desregulação é frequentemente estudada em contextos de comportamento celular invasivo e de microambientes inflamatórios. Por isso, PLAU é amplamente usado como um nó funcional para investigar dinâmicas da matriz impulsionadas por proteases, motilidade celular e programas génicos associados à remodelação.

uPA/urokinase/PLAU O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLAU sem alterar a sequência de ADN subjacente.

uPA/urokinase/PLAU O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLAU em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLAU, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de uPA/urokinase/PLAU. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLAU nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de uPA/urokinase/PLAU no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via uPA/urokinase/PLAU em células tumorais com expressão de PLAU silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.