ULBP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403835-ACT

ULBP1（UL16結合タンパク質1）は、ストレスによって誘導される細胞表面糖タンパク質であり、NK細胞および一部のT細胞に発現する活性化受容体NKG2D（KLRK1）のリガンドとして機能します。ULBP1がNKG2Dに結合することで、細胞ストレスやDNA損傷応答、形質転換に伴うシグナルを感知する免疫監視経路に寄与し、細胞傷害性リンパ球の活性化やサイトカインシグナル伝達プログラムに影響を与えます。ULBP1の発現変化やシェディング（細胞表面からの遊離）は、複数の悪性腫瘍および炎症性の状況で観察されており、NKG2Dリガンドの利用可能性の変動が免疫認識や免疫回避機構を調節し得ます。そのためULBP1は、ストレスを受けた細胞と細胞傷害性エフェクター集団の接点にある免疫調節チェックポイントを研究するうえで有用なモデルです。

ULBP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ULBP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ULBP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ULBP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はULBP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ULBP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のULBP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるULBP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびULBP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるULBP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。