UHRF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421937-ACT

O gene Uhrf1 de camundongo codifica a UHRF1, um regulador epigenético multidomínio que reconhece DNA hemimetilado e marcas de histonas para coordenar a manutenção da metilação do DNA durante a fase S. Ao recrutar a DNMT1 e interagir com enzimas modificadoras de cromatina, a UHRF1 ajuda a preservar padrões de metilação em todo o genoma, sustenta a integridade da heterocromatina e influencia a montagem de cromatina acoplada à replicação. Essas atividades conectam a UHRF1 ao controle do ciclo celular, às respostas a danos no DNA e a programas transcricionais que regulam proliferação e diferenciação. A expressão desregulada de UHRF1 e paisagens aberrantes de metilação do DNA estão frequentemente associadas à reprogramação transcricional oncogênica e à instabilidade genômica, tornando Uhrf1 um ponto-chave para o estudo de mecanismos epigenéticos de doenças.

UHRF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Uhrf1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UHRF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Uhrf1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Uhrf1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UHRF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Uhrf1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UHRF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UHRF1 em células tumorais com expressão de Uhrf1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.