UHRF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403851-ACT

UHRF1 (ubiquitina‑like com domínios PHD e RING finger 1) é um regulador epigenético que coordena a manutenção da metilação do DNA com a modificação da cromatina durante a fase S. Ao reconhecer DNA hemimetilado e marcas específicas de histonas, o UHRF1 recruta a DNMT1 e fatores associados para preservar programas de silenciamento transcricional que influenciam a progressão do ciclo celular, a estabilidade do genoma e as respostas a danos no DNA. A expressão desregulada de UHRF1 está ligada a paisagens de metilação aberrantes e a programas de proliferação alterados observados em diversos contextos da biologia do câncer. Como uma proteína “hub” da cromatina, o UHRF1 é frequentemente estudado por seu papel na herança epigenética, na montagem de cromatina acoplada à replicação e em redes de repressão transcricional.

UHRF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UHRF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UHRF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UHRF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UHRF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UHRF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UHRF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UHRF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UHRF1 em células tumorais com expressão de UHRF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.