UGT2B7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404209-ACT

UGT2B7 codifica uma UDP-glucuronosiltransferase humana que catalisa a glucuronidação de diversos substratos endógenos e xenobióticos, aumentando a sua solubilidade em meio aquoso para promover a depuração celular. Essa atividade de conjugação de Fase II integra-se às redes de metabolismo de fármacos hepáticas e extra-hepáticas e coordena-se com processos de exportação mediados por transportadores em vias de desintoxicação. Variações na expressão ou na atividade de UGT2B7 estão associadas a diferenças interindividuais na capacidade metabólica, influenciando a exposição celular a compostos lipofílicos bioativos e as respostas ao estresse oxidativo. Como um nó-chave na conjugação por glucuronídeos, a UGT2B7 é frequentemente investigada em farmacogenômica, toxicologia e modelos de doenças focados em metabolismo, nos quais alterações na conjugação afetam a sinalização celular e a homeostase.

UGT2B7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UGT2B7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UGT2B7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UGT2B7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UGT2B7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UGT2B7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UGT2B7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UGT2B7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UGT2B7 em células tumorais com expressão de UGT2B7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.