UGT2B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404208-ACT

UGT2B4 humano codifica uma UDP-glicuronosiltransferase da subfamília UGT2B que catalisa a glicuronidação de esteroides endógenos, metabólitos relacionados a ácidos biliares e diversos xenobióticos, aumentando a sua solubilidade para eliminação. Essa atividade enzimática sustenta o metabolismo de fase II em redes de destoxificação associadas ao retículo endoplasmático e se integra a vias de depuração hepática reguladas por sinalização de receptores nucleares e pela homeostase redox. Variações na expressão ou na atividade de UGT2B4 podem alterar o destino de hormônios esteroides e o processamento de xenobióticos, tornando-o relevante para estudos sobre diferenças interindividuais no metabolismo de fármacos, regulação endócrina e fenótipos de estresse metabólico. Como parte do panorama funcional mais amplo de UGT2B, UGT2B4 é frequentemente investigado em conjunto com sistemas de transporte e de conjugação que, em conjunto, moldam a exposição celular a pequenas moléculas bioativas.

UGT2B4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UGT2B4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UGT2B4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UGT2B4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UGT2B4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UGT2B4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UGT2B4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UGT2B4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UGT2B4 em células tumorais com expressão de UGT2B4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.