UGT1A3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402839-ACT

UGT1A3は、肝臓および腸に発現するUDP-グルクロン酸転移酵素（UDP-グルクロン酸抱合酵素）をコードしており、脂溶性化合物のグルクロン酸抱合（グルクロン酸化）を触媒することで水溶性を高め、胆汁および腎臓を介した排泄を促進します。UGT1A3は第II相の外来異物代謝の一部として、胆汁酸やステロイド由来基質などの内因性分子に加え、多様な医薬品を抱合することで、化学的解毒と代謝恒常性の維持に寄与します。その活性は、薬物代謝酵素やトランスポーターの転写制御を統括する核内受容体によって調節される、より広範な外来異物応答ネットワークとも連動しています。UGT1A3の発現変動や機能的多型は、外来異物の代謝・体内動態における個人差と関連し、薬理ゲノミクスや毒性学における機序研究に重要な情報を与えます。

UGT1A3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UGT1A3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UGT1A3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UGT1A3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUGT1A3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UGT1A3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUGT1A3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUGT1A3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUGT1A3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUGT1A3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。